目的：提取骨髓中間充質(zhì)干細(xì)胞并培養(yǎng)
主要內(nèi)容：
步驟一：小鼠或大鼠骨髓細(xì)胞的獲取
1． 斷頸處死小鼠（7-12周，雌雄均可），投入盛有250ml左右的0.1%新潔爾滅或75%酒精中浸泡3-5分鐘，拎出后將小鼠仰面翻鋪于超凈臺上一個消毒托盤上。
2． 用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關(guān)節(jié)之間的腹部皮膚，用眼科剪小心剪開皮膚，并分離兩下肢的皮膚，往下在腳踝處剪斷，往上在髖關(guān)節(jié)處剪斷，這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。將它們放入另外一個消毒托盤中，并換一套新的剪子和鑷子。手術(shù)器械事先均必須消毒。
3． 小心剝離肌肉，分別剪下Femurs and Tibias, 剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。
4． 拿兩支5ml無菌注射器，每支吸取5ml IMDM(10%FBS, 50/50u/ml Pen/Strep)，換裝一個4號針頭（又稱皮針）或1ml注射器的針頭，并用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔，對準(zhǔn)一個無菌15ml離心管，將細(xì)胞沖出。每根骨用2.5ml IMDM培養(yǎng)液左右即可基本沖下骨髓腔內(nèi)的細(xì)胞。
5． <300C下離心，1200轉(zhuǎn)/10分鐘，去上清，但留1ml，以便用于在振蕩器上懸浮細(xì)胞。
6． 加進(jìn)氯化銨溶液（NH4Cl: 8.99g/L, KHCO3: 1g/L, Na4-EDTA: 0.037g/L ，過濾滅菌, 40C儲存）裂解紅細(xì)胞，按1: 9比例，即1ml 細(xì)胞懸液，加進(jìn)9ml氯化銨溶液，混勻，冰上10分鐘。
7． <300C離心，1200轉(zhuǎn)/10分鐘，去上清。
步驟二：淋巴細(xì)胞分離液分離小鼠骨髓細(xì)胞
1． 按步驟二方法采集小鼠骨髓細(xì)胞，并破紅細(xì)胞
2． 細(xì)胞用4ml培養(yǎng)液懸浮，緩慢留置于8ml淋巴細(xì)胞分離液液面上，2000rpm for 20min.
3． 小心吸取云霧狀底層的基質(zhì)細(xì)胞約1.5ml的體積，置于1個盛有1ml無菌細(xì)胞培養(yǎng)用PBS的15ml離心管中，顛倒混勻，1200rpm for 10min, 去上清
4． 如果是注射用細(xì)胞，則用5ml PBS洗滌細(xì)胞2次；
5． 離心沉淀下來的細(xì)胞用50-200ul PBS，計(jì)數(shù)細(xì)胞，并計(jì)算所需細(xì)胞體積數(shù)然后鋪板培養(yǎng)
