大鼠新生鼠
2012-05-041714
目的： 完整取出鼠腦及后期固定
操作步驟
流程：1)麻醉 2)開胸 3)心臟解剖 4)生理鹽水沖水 5)4%多基甲醛固定 6)取腦 7)保存或切片.
1 多聚甲醛的配置：
一般方法為：4％多聚甲醛PBS緩沖液配法：稱取40g PFA溶于裝有800ml PBS的玻璃容器（燒杯或燒瓶）中，持續(xù)加熱磁力攪拌至60～65℃，使成乳白色懸液。用1.0mol/L的NaOH值至7.0，使呈清亮狀（滴加），過濾后定容至1000ml，室溫或4℃保存?zhèn)溆谩?br />
2 實驗準備：準備兩個10ml注射器，剪刀，彎鑷、PBS 10ml/只、4%PFA 10ml/只。
3 麻醉后開胸：因老鼠較小，可冰凍麻醉，或者用致死量麻醉。沿肋弓下向左右剪開，至雙側腋中線向上剪開，然后向上翻起胸壁，充分暴露心臟。
4 心臟穿刺：在右心耳處用針扎出一個小孔，用裝有PBS針筒在左心室進行穿刺。
5 灌流：緩慢灌注PBS 10ml，見到老鼠兩前肢及兩肺變白可改灌注多聚甲醛，多聚甲醛的灌流也同PBS。
6 灌注成功的標志：剛開始灌注時老鼠劇烈抽動；成功后老鼠后肢繃直，尾部豎起成一直線；所灌注的腦組織白而硬。
7 取腦：分離除去后頸部肌肉 ，用彎鑷小心取出腦組織。
8 后固定：灌流后的腦組織置于4％PFA置4度冰箱內進行后固定，時間>2h，過夜最好。
