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目的： 完整取出大鼠腦部（取材）
操作步驟
流程：1)麻醉 2)開胸 3)心臟左心室穿針,剪開右心耳 4)生理鹽水沖水 5)4%多基甲醛固定 6)取腦 7)保存或切片.
1 多聚甲醛的配置：
一般方法為：4％多聚甲醛PBS緩沖液配法：稱取40g PFA溶于裝有500ml DEPC水的玻璃容器（燒杯或燒瓶）中，持續(xù)加熱磁力攪拌至60～65℃，使成乳白色懸液。用 1.0mol/L的NaOH值至7.0，使呈清亮狀（滴加），再加入約500ml PBS，充分混勻（在冰浴或冷水浴中），可再檢測一下pH，過濾后定容至1000ml，室溫或4℃保存?zhèn)溆谩?br />
我們用的方法：加熱至60～65℃固然融解的快，不過容易揮發(fā)，氣味難聞，不是好的選者。我們是這樣做的，感覺不錯，在此強(qiáng)烈推薦：先配好pbs，稱好相應(yīng)的多聚甲醛， 37c水浴或溫箱密封放置2天，就能全溶。
3 麻醉后開胸：暴露充分些容易心臟穿刺及剪開右心耳。箭頭所指為右心耳。
4心尖插入灌注針頭，剪開右心耳，開放靜脈血。
5 夾閉腹主動脈：只灌注上肢及頭腦，固定的好又快，又省多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。
6 先灌注生理鹽水約100ml，見到老鼠兩前肢及兩肺變白可改灌注多聚甲醛。
7 灌注成功的標(biāo)志：剛開始灌注時老鼠前肢劇烈抽動（下肢不抽動證明腹主動脈夾閉完全）；前肢及頸部僵硬；所灌注的腦組織白而硬。
8 分離除去后頸部肌肉 。
9 用彎鉗仔細(xì)剔除顱骨 。
名稱：大鼠幽門結(jié)扎性潰瘍(pylorus ligated gastric ulcer) 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)
關(guān)鍵詞：大鼠 幽門結(jié)扎性潰瘍
目的：制備潰瘍病模型,評價抗?jié)兯幍淖饔?br />
原理：大鼠幽門結(jié)扎后胃液滯留,胃酸和胃蛋白酶對胃粘膜長時間消化,引起潰瘍
主體內(nèi)容：
1.器材：手術(shù)剪，縫合線(粗)，持針器，皮鑷子，止血鉗。鐵絲鼠籠。手術(shù)燈，縫合用25 W照明燈3個。乙醚，麻醉鐘罩及麻醉口罩。標(biāo)本固定瓶，平皿。10%福馬林。大鼠手術(shù)臺4個。分光光度計。生理鹽水。
2.潰瘍指數(shù)測定
大鼠60只，體重150-250 g均可，一批實(shí)驗體重范圍<50g, ♂♀均可。 隨機(jī)分為以下6組:
第1組:對照組， 生理鹽水 5 ml/kg
第2組:賦形劑組 5 ml/kg
第3組:法莫替丁 40 mg/kg
第4組:受試藥 低劑量
第5組:受試藥 中劑量
第6組:受試藥 高劑量
另取大鼠4只，為衛(wèi)星組，處理同對照組，于手術(shù)后14、16h各處死2只，動態(tài)觀察潰瘍形成情況。
給藥時間：如考慮為局部作用者，可術(shù)前給藥；如為吸收作用者，結(jié)扎后在12指腸內(nèi)給藥。
大鼠禁食(不禁水) 48-72小時時在乙醚麻醉下結(jié)扎幽門。碘伏消毒皮膚，在劍突下一橫指以下正中切一1 cm縱行切口，注意切開皮膚時先輕后重，以免割傷肝臟。止血鉗鈍行撐開腹膜，用止血鉗（頭子上穿硅膠管）夾出胃及十二指腸，找出胃和十二指腸交界處，在十二指腸下避開血管穿雙線線（用縫合針），用雙線結(jié)扎。注意結(jié)扎時確保線置于幽門與十二指腸連接處，如結(jié)扎位置低時，十二指腸液反流，可使病變減輕。間斷縫合腹壁肌肉和皮膚（各三針）。每組結(jié)扎開始及結(jié)束時均記錄時間。術(shù)后禁食、禁水，結(jié)扎后14-18小時（一般為18h）頸椎脫臼處死（處死時間視衛(wèi)星組大鼠形成潰瘍而定）， 將10%福馬林注入胃內(nèi)，固定30分鐘后取胃沿胃大彎剪開，平鋪后用攝象機(jī)攝象(放大7倍)，用真彩色圖象分析儀測量潰瘍面積(ulcer area)，按Okabe法計算潰瘍指數(shù)(ulcer index)。潰瘍指數(shù)計算如下:
潰瘍面積(mm2 ): 1-12 13-25 26-37 38-50 ≥50或穿孔
潰瘍指數(shù): 1 2 3 4 5
試驗時間安排舉例：
2001年2月27日8:00am開始禁食，不禁水
2001年3月1日:7:30pm開始結(jié)扎（結(jié)扎后立即十二指腸內(nèi)注入藥物0.5 ml/kg），術(shù)后禁食水
2001年3月2日1：30取材。
3. 大鼠胃液分泌量、胃液酸度和胃蛋白酶的測定。
選體重為180-220 g 大鼠，雌雄各半，按性別、體重隨機(jī)分組，禁食48小時，自由飲水， 灌胃給藥30分鐘后在乙醚麻醉下開腹結(jié)扎幽門， 6小時后收集胃液，離心分離胃液，按下法測定胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶活性：
(1). 胃液量及胃液 pH測定:
收集離心后的胃液，用量筒測量胃液體積，用酸度計測胃液pH值。
(2).游離鹽酸及總酸度測定:
取5 ml胃液，用酸度計監(jiān)測，用0.1N NaOH滴定至pH 7.0，記錄所耗用的NaOH毫升數(shù)，計算游離鹽酸。然后加入1%酚酞2滴為指示劑，再繼續(xù)用0.1N NaOH滴定至出現(xiàn)酚酞色，記錄所耗用的NaOH總量，計算總酸。
游離酸(mmol/L)=滴定5 ml胃液(至pH7.0)用去0.1N NaOH(ml) ×20
總 酸(mmol/L)=滴定5 ml胃液(至出現(xiàn)酚酞色)用去0.1N NaOH(ml)×20
總酸排出量(mmol/L•h)=總酸度×胃液體積÷6
(3)胃蛋白酶活性測定
取離心胃液0.1ml，加入1%牛血清白蛋白(0.1 N NCl配制) 1 ml.37℃溫孵20分鐘，加入2 ml 1%三氯乙酸，并在沸水中加熱5分鐘，冷卻后過濾，取濾出液0.2ml，加入2 ml 0.1 N HCl、3.5 ml 0.6 N NaOH溶液，同時加入稀釋后的Folin-酚試劑1.5 ml， 混勻、靜置10分鐘后在680 nm處測光密度。以酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計算胃蛋白酶活性。以μmol/h酪氨酸表示胃蛋白酶排出量。胃蛋白酶活性單位規(guī)定為每分鐘生成 1 μmol 酪氨酸作為1個活性單位。
