1、流式細(xì)胞儀上的FL2-W FL2-A FL2-H 分別是做什么的？
FL2-W是只檢測(cè)熒光的脈沖寬度， FL2-H是指脈沖高度。通常在做細(xì)胞周期分析時(shí)應(yīng)用，用于去除粘連細(xì)胞。
2、流式同型對(duì)照怎樣選擇？
同型對(duì)照（Isotype Control）：使用與一抗相同種屬來(lái)源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面而產(chǎn)生的背景染色。如果一抗是多抗，可以用an normal serum（與一抗相同的正常血清） （must be the same species as primary antibody）。This control is easy to achieve and can be used routinely in immunohistochemical staining.這個(gè)可以咨詢?cè)噭┥獭Ｍ蛯?duì)照為免疫熒光標(biāo)記中的陰性對(duì)照。由于熒光標(biāo)記單抗的組來(lái)源不同，應(yīng)選用相同來(lái)源的未標(biāo)記單抗作為同型對(duì)照來(lái)調(diào)整背景染色。舉個(gè)例子：比如檢測(cè)一抗為單抗的mouse anti rat CD11b，clone OX-42 purified IgG，那么它的isotype 是mouse IgG2a， 所以可以用purified（純化的） mouse IgG2a來(lái)做OX-42的同型對(duì)照（Isotype Control）。一般的的生物技術(shù)公司和國(guó)內(nèi)的代理都有出售。
同型對(duì)照：是指與MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亞類，若使用直接免疫熒光染色法，同型對(duì)照也應(yīng)標(biāo)記熒光色素，如IgG1 FITC、IgG2ａ、PE等。主要考慮了細(xì)胞的自發(fā)熒光、FC受體介導(dǎo)的抗體結(jié)合和非特異性抗體結(jié)合等影響因素。此外，同型對(duì)照與MoAb所標(biāo)記的熒光色素、濃度、F：P比值（標(biāo)記的熒光色素與免疫球蛋白分子的比值）應(yīng)該相同為最佳，這對(duì)準(zhǔn)確設(shè)定陰性與陽(yáng)性細(xì)胞的界標(biāo)有重要意義，切忌使用與MoAb不相匹配的同型對(duì)照，最好為同一實(shí)驗(yàn)室、采用相同工藝或方法制備（如同一品牌）的產(chǎn)品。
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