學(xué)習(xí)中心
克隆構(gòu)建是分子生物學(xué)研究中最常用到的手段之一。但由于影響因素較多，對研究者經(jīng)驗要求較高，因而往往費(fèi)時費(fèi)力。我公司憑借長期分子生物學(xué)工作的豐富經(jīng)驗，集中人力，為您提供更高效、更快捷的服務(wù)，包括克隆構(gòu)建及其上下游相關(guān)服務(wù)的完整解決方案，并將依據(jù)目的基因的來源，靈活選擇不同的克隆方法，包括從基因組中分離目的基因，由特定mRNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA后再進(jìn)行克隆和PCR體外擴(kuò)增目的片段進(jìn)行克隆等。
1、載體構(gòu)建
可根據(jù)已有載體進(jìn)行改造方案的設(shè)計，完成現(xiàn)有載體不同功能元件的改造；可應(yīng)客戶要求將指定片段亞克隆至各載體。
（1）您需要提供載體改造的具體要求、預(yù)進(jìn)行改造的質(zhì)粒（序列經(jīng)測序驗證正確）及其圖譜和序列、能夠獲得所需元件或基因的模板（質(zhì)?；蚱渌┘捌湎嚓P(guān)圖譜和序列。
（2）我們提供構(gòu)建好的質(zhì)粒、菌種，測序驗證報告。
2、ORF克隆
從動物組織或細(xì)胞中提取mRNA，通過RT-PCR擴(kuò)增獲得所需目的基因，并克隆到T載體或由客戶指定的載體當(dāng)中。
（1） 您需要提供目的基因序列，能夠獲得目的基因序列的材料或上述材料的總RNA：1) 實驗材料必須保證新鮮，請您采樣后立即放入液氮中速凍或加入樣品穩(wěn)定劑；2)總RNA無明顯降解，總量大于5 mg。如果基因豐度較低或調(diào)取的基因較長，請您提供盡量多的材料。
（2） 我們提供含有目的基因的質(zhì)粒及菌種。由于材料的個體差異等原因，我們不保證獲取的基因與參考序列的堿基完全一致。
3、PCR產(chǎn)物克隆
直接將客戶提供的PCR產(chǎn)物（3’端加A）克隆至T載體中。
（1） 您需要提供體積大于40ul，總量不少于1ug的PCR產(chǎn)物及克隆片段大小。
（2） 我們提供含有目的片段的質(zhì)粒和菌種及測序驗證報告。
4、定點突變
體外定點突變技術(shù)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的復(fù)雜關(guān)系的有力工具，也是我們在實驗室中改造、優(yōu)化基因的常用的手段。我公司依靠豐富的分子生物學(xué)的實驗經(jīng)驗，可幫您完成不同載體不同難度的定點突變，根據(jù)突變需要，向目的基因片段中引入任何可能的DNA變異，包括一段堿基的添加、刪除、替換等。使您能夠順利完成下一步的試驗計劃，并節(jié)省您寶貴的時間。
（1） 您需要提供原始質(zhì)粒、質(zhì)粒圖譜（包括大小信息）和序列、突變位點要求。
（2）我們提供突變成功的質(zhì)粒和菌株及測序報告。
