【摘要】目的: 探討單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用維甲酸( retinoic acid，RA) 與purmorphamine ( 2，6，9-三取代嘌呤化合物，PM) 對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞( human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs) 向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的影響，為其進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法: 用雙酶消化法提取純化hUCMSCs，取傳至第3 代的hUCMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面抗原CD29、CD31、CD34、CD44 的表達(dá)情況。根據(jù)加入不同誘導(dǎo)劑分4 組: 空白對(duì)照組; RA 組( 加入0． 5 μg /ml RA) ; PM 組( 加入1 μg /ml PM) ; RA + PM 組( 加入0． 5 μg /ml RA 和1 μg /ml PM) 。細(xì)胞誘導(dǎo)后第20d，觀察細(xì)胞形態(tài)的變化; 采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Nestin、β-tubulin-III、Hb9、ChAT 的表達(dá)情況，比較各組細(xì)胞陽性表達(dá)的比例。RA + PM 組細(xì)胞誘導(dǎo)5、10、15、20、25 d 后收集細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ach 的含量。結(jié)果: 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，CD29、CD44 高表達(dá)，CD31 陰性，CD34 不表達(dá)?？瞻讓?duì)照組和PM 組細(xì)胞誘導(dǎo)后形態(tài)變化不明顯，Nestin 和β-tubulin-III 陽性表達(dá)率均很低，兩者之間無差別。RA 組和RA + PM 組的誘導(dǎo)后細(xì)胞具有典型的神經(jīng)元樣形態(tài); 且Nestin 和β-tubulin-III 陽性表達(dá)率比其他兩組高，有顯著性差異( P ＜ 0． 01) 。4 組中只有RA + PM組細(xì)胞誘導(dǎo)后出現(xiàn)Hb9 表達(dá)陽性，其他各組均無Hb9 表達(dá)。RA + PM 組ChAT 高表達(dá)，RA 組僅少量表達(dá)。從第15 d 起，RA + PM 組細(xì)胞可檢測(cè)到Ach，其含量隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加。結(jié)論: RA 能促進(jìn)hUCMSCs 向神經(jīng)元分化，單獨(dú)使用PM 并沒有明顯效果，而RA 聯(lián)合PM 能顯著促進(jìn)hUCMSCs 向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化。
【關(guān)鍵詞】人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞; 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元; 維甲酸; purmorphamine; 誘導(dǎo)
